ХімТехДопомога

Допомога в питаннях, пов'язаних з хімічною промисловістю починаючи від важкого машинобудування і закінчуючи поліграфією та друком

Генетична інженерія грибів

Трансген може бути введений в еукаріотичну клітину різними методами, включаючи трансформацію, ін’єкцію, бактеріальну та вірусну інфекцію, бомбардування золотими або вольфрамовими частинками, вкритими ДНК. Коли трансген попадає в клітину, він здатний пройти до ядра і стати стабільною частиною геному після  вбудовування в хромосому або реплікуватися як частина плазміди.

ingeneriya_grubivЯкщо відбувається  вбудовування, то трансген або заміщує резидентний (постійний) ген або вставляється ектопічно, тобто не замість гена реципієнта, а в інші місця геному. Сторонні гени частіше за все вставляються ектопічно.

Більшість методик генетичної інженерії еукаріотів   була розроблена на дріжджах.  Зручними  об’єктами  для генетичної інженерії є пекарські дріжджі Saсcharomyces cerevisiae. В суспензії дріжджі ростуть у вигляді окремих клітин, а на твердому субстраті утворюють колонії подібно Е.соlі. Подвоєння клітин на звичайному поживному середовищі здійснюється за 1,5-2 години. А тому відносно швидко і без особливих витрат можна отримати велику кількість цих непатогенних організмів. Гаплоїдний геном Saсcharomyces cerevisiae містить 1,4·107 п.н., що приблизно в три рази більше, ніж геном Е.соlі. У цього виду в гаплоїдних клітинах міститься 17 хромосом. Відома єдина дріжджова кільцева дволанцюгова плазміда довжиною 6318 п.н. Вона містить ділянку   реплікації ДНК ori і гени rep1, rep2 і rep3, які забезпечують утворення до 50 копій плазміди на дріжджову клітину. Приблизно 50% плазмідної ДНК необхідно для її реплікації і збереження в клітинах, інші 50% несуттєві і можуть бути замінені на чужорідні фрагменти. Ця плазміда використана для створення човникового вектора.

Трансформація ДНК у дріжджові клітини досить ефективна. Для цього целюлозну клітинну стінку дріжджів видаляють ферментами, отримуючи сферопласти. Їх інкубують з ДНК у присутності поліетиленгліколю за високих концентрацій СаС12. В цих умовах мембрана стає проникливою для ДНК. Клітинна стінка на сферопластах відновлюється спонтанно. Відбираються трансформанти завдяки тому, що вони разом з векторною ДНК отримують необхідну ознаку і на відміну від нетрансформованих клітин здатні утворювати колонії на збіднілому  живильному середовищі.

Переваги дріжджових клітин  для генетичної інженерії полягають не лише в тому, що вони є  еукаріотичними і містять необхідний апарат для експресії  еукаріотичних  генів, але й тому, що вони секретують велику кількість білків у  живильному середовище.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

ХімТехДопомога © 2015 Сайт присвячений хімічній промисловості, починаючи від важкого машинобудування і закінчуючи поліграфією та друком. Детальні огляди можливостей промислових досягнень. На сайті згадуються такі теми як: протикорозійний захист, методи другу видавничої продукції, технології виробництва термопластів, додрукарська підготовка видання та багато іншого.