ХімТехДопомога

Допомога в питаннях, пов'язаних з хімічною промисловістю починаючи від важкого машинобудування і закінчуючи поліграфією та друком

Фагові вектори

Бактеріофаги – це група  вірусів, здатних розмножуватися лише в бактеріальних клітинах.  Більшість фагів містить дволанцюгову ДНК  як генетичний матеріал, хоча у деяких бактеріофагів цю функцію виконує одноланцюгова ДНК або одноланцюгова РНК. Бактеріофаг-вектор захоплює  фрагмент донорної ДНК і включає його  як вставку у свою молекулу ДНК, причому різні класи бактеріофагових векторів можуть нести вставки донорної ДНК різного розміру.  Фагові вектори конструюють на  базі ДНК фагів з таким розрахунком, щоб в них зберігалася інформація, яка забезпечує збірку фагових частинок in vivo.  Для клонування у клітинах  E.coli  такі векторі  розроблені на базі ДНК фагів ? та М13. bacteriofag_2

У першому випадку фагові головки мають строго визначену  геометрію, так що вектори здатні включати  таку кількість  чужорідної ДНК, щоб рекомбінантні ДНК, що утворилися, могли упаковуватися в головки фага. З цієї причини вектори на основі фага ?  характеризуються своєю ємністю.      Бактеріофаг ? є одним з ефективних фагових векторів. Довжина його ДНК  близько 50 тис.п.н. Він здатний бути вектором для клонування дволанцюгових ДНК-вставок довжиною 15 тис.п.н. Центральна частина геному фага ? не потрібна для реплікації та упаковки молекули ДНК фага     і тому може бути видалена за допомогою ферментів рестрикції та замінена вставкою донорної ДНК. Довжина вставки має бути близько 10-15 тис.п.н. для збереження  загального розміру ДНК фага ? у 50 тис.п.н. Після поєднання донорної ДНК та векторної ДНК бактеріофага рекомбінантні молекули можуть бути запаковані у головки фага  in vitro  і потім введені у бактерію або може бути проведена трансформація клітин E.coli   такими рекомбінантними молекулами. Наявність фагових бляшок на бактеріальному газоні свідчить про присутність рекомбінантного фага.

Для нитковидних фагів, до яких відноситься  М13, поняття ємності не може бути застосовано. Величина ДНК, що в них клонується, визначається вимогами експерименту до стабільності фагових частинок.

Добавить комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

ХімТехДопомога © 2015 Сайт присвячений хімічній промисловості, починаючи від важкого машинобудування і закінчуючи поліграфією та друком. Детальні огляди можливостей промислових досягнень. На сайті згадуються такі теми як: протикорозійний захист, методи другу видавничої продукції, технології виробництва термопластів, додрукарська підготовка видання та багато іншого.